Puhdas Saposhnikovia divaricata -öljy kynttilän ja saippuan valmistukseen tukkumyyntidiffuusorin eteerinen öljy, uusi ruokolamppudiffuusoreille

lyhyt kuvaus:

2.1. SDE:n valmistelu

SD:n juurakot ostettiin kuivattuina yrtteinä Hanherb Co.:lta (Guri, Korea). Kasvimateriaalin taksonomisen varmisti tohtori Go-Ya Choi Korean itämaisen lääketieteen instituutista (KIOM). Yksi näytekappale (numero 2014 SDE-6) on talletettu Korean Herbarium of Standard Herbal Resources -kokoelmaan. Kuivattuja SD:n juurakoita (320 g) uutettiin kahdesti 70-prosenttisella etanolilla (2 tunnin refluksoinnilla) ja uute väkevöitiin sitten alennetussa paineessa. Keite suodatettiin, kylmäkuivattiin ja säilytettiin 4 °C:ssa. Kuivatun uutteen saanto raaka-aineista oli 48,13 % (p/p).

2.2. Kvantitatiivinen korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) -analyysi

Kromatografinen analyysi suoritettiin HPLC-järjestelmällä (Waters Co., Milford, MA, USA) ja fotodiodirividetektorilla. SDE:n HPLC-analyysissä prim-O-glukosyylikimifugiinistandardi hankittiin Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry -instituutilta (Gyeongsan, Korea), jasec-O-glukosyylihamaudoli ja 4′-O-β-D-glukosyyli-5-O-metyylivisamminoli eristettiin laboratoriossamme ja tunnistettiin spektrianalyyseillä, pääasiassa NMR:llä ja MS:llä.

SDE-näytteet (0,1 mg) liuotettiin 70-prosenttiseen etanoliin (10 ml). Kromatografinen erottelu suoritettiin XSelect HSS T3 C18 -kolonnilla (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Liikkuva faasi koostui asetonitriilistä (A) ja 0,1 % etikkahaposta vedessä (B) virtausnopeudella 1,0 ml/min. Käytettiin monivaiheista gradienttiohjelmaa seuraavasti: 5 % A:ta (0 min), 5–20 % A:ta (0–10 min), 20 % A:ta (10–23 min) ja 20–65 % A:ta (23–40 min). Detektioaallonpituus skannattiin aallonpituudella 210–400 nm ja rekisteröitiin aallonpituudella 254 nm. Injektiotilavuus oli 10,0μL. Kolmen kromonin määrittämiseen tarkoitetut standardiliuokset valmistettiin lopulliseen pitoisuuteen 7,781 mg/ml (prim-O-glukosyylikimifugiini), 31,125 mg/ml (4′-)O-β-D-glukosyyli-5-O-metyylivisamminoli) ja 31,125 mg/ml (sec-O-glukosyylihamaudoli) metanolissa ja säilytetään 4 °C:ssa.

2.3. Tulehdusta estävän vaikutuksen arviointiIn vitro

2.3.1. Soluviljely ja näytteen käsittely

RAW 264.7 -solut saatiin American Type Culture Collectionista (ATCC, Manassas, VA, USA) ja niitä kasvatettiin DMEM-elatusaineessa, joka sisälsi 1 % antibiootteja ja 5,5 % FBS:ää. Soluja inkuboitiin kostutetussa 5 % CO2:ta sisältävässä ilmakehässä 37 °C:ssa. Solujen stimuloimiseksi elatusaine korvattiin tuoreella DMEM-elatusaineella ja lipopolysakkaridilla (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) 1 %:ssa.μµg/ml lisättiin SDE:n läsnä ollessa tai ilman sitä (200 tai 400μg/ml) vielä 24 tunnin ajan.

2.3.2. Typpioksidin (NO), prostaglandiini E2:n (PGE2) ja tuumorinekroositekijän määritysα(TNF-α) ja interleukiini-6:n (IL-6) tuotanto

Soluja käsiteltiin SDE:llä ja stimuloitiin LPS:llä 24 tunnin ajan. NO-tuotantoa analysoitiin mittaamalla nitriitti Griessin reagenssilla aiemman tutkimuksen mukaisesti [12Tulehduksellisten sytokiinien PGE2:n, TNF:n eritysα, ja IL-6 määritettiin ELISA-kitillä (R&D systems) valmistajan ohjeiden mukaisesti. SDE:n vaikutukset NO:n ja sytokiinien tuotantoon määritettiin 540 nm:ssä tai 450 nm:ssä käyttäen Wallac EnVision -laitetta™mikrolevylukija (PerkinElmer).

2.4. Nivelrikon vastaisen vaikutuksen arviointiIn vivo

2.4.1. Eläimet

Urospuoliset Sprague-Dawley-rotat (7 viikon ikäiset) hankittiin Samtako Inc.:ltä (Osan, Korea) ja niitä pidettiin kontrolloiduissa olosuhteissa 12 tunnin valo-/pimeäsyklin avulla°C ja% ilmankosteutta. Rotille annettiin laboratorioruokaa ja vettärajoittamattomastiKaikki kokeelliset toimenpiteet suoritettiin Yhdysvaltain kansallisten terveyslaitosten (NIH) ohjeiden mukaisesti ja Daejeonin yliopiston (Daejeon, Korean tasavalta) eläintenhoito- ja käyttökomitea hyväksyi ne.

2.4.2. OA:n indusointi MIA:lla rotilla

Eläimet satunnaistettiin ja jaettiin hoitoryhmiin ennen tutkimuksen aloittamista (ryhmää kohden). MIA-liuos (3 mg/50μOikean polven niveltilaan injektoitiin 0,9-prosenttista keittosuolaliuosta suoraan ketamiinin ja ksylatsiinin seoksella indusoidun anestesian alaisena. Rotat jaettiin satunnaisesti neljään ryhmään: (1) keittosuolaliuosryhmä, jolle ei annettu MIA-injektiota, (2) MIA-ryhmä, jolle annettiin MIA-injektiota, (3) SDE-hoitoa saanut ryhmä (200 mg/kg) MIA-injektiolla ja (4) indometasiinia (IM) saanut ryhmä (2 mg/kg) MIA-injektiolla. Rotille annettiin SDE:tä ja IM:ää suun kautta viikkoa ennen MIA-injektiota neljän viikon ajan. Tässä tutkimuksessa käytetty SDE- ja IM-annos perustui aiemmissa tutkimuksissa käytettyihin annostusiin [10,13,14].

2.4.3. Takakäpälien painonjakauman mittaukset

Nivelrikon induktion jälkeen takakäpälien alkuperäinen tasapaino painonkantokyvyssä häiriintyi. Painonkantokyvyn muutosten arvioimiseksi käytettiin toimintakyvyttömyysmittaria (Linton instrumentation, Norfolk, Iso-Britannia). Rotat asetettiin varovasti mittauskammioon. Takaraajan painonkantovoima keskiarvoistettiin 3 sekunnin ajalta. Painon jakautumissuhde laskettiin seuraavalla yhtälöllä: [oikean takaraajan paino / (oikean takaraajan paino + vasemman takaraajan paino)] × 100 [15].

2.4.4. Seerumin sytokiinitasojen mittaukset

Verinäytteet sentrifugoitiin 1 500 g:n voimalla 10 minuutin ajan 4 °C:ssa; sitten seerumi kerättiin ja säilytettiin −70 °C:ssa käyttöön asti. IL-1-pitoisuudetβ, IL-6, TNF-αja PGE2 seerumissa mitattiin R&D Systemsin (Minneapolis, MN, USA) ELISA-kittien avulla valmistajan ohjeiden mukaisesti.

2.4.5. Reaaliaikainen kvantitatiivinen RT-PCR-analyysi

Kokonais-RNA eristettiin polvinivelkudoksesta käyttämällä TRI-reagenssia® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), käänteiskopioitiin cDNA:ksi ja PCR-amplifioitiin käyttämällä TM One Step RT PCR -kittiä ja SYBR green -väriainetta (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Reaaliaikainen kvantitatiivinen PCR suoritettiin käyttämällä Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR -järjestelmää (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Alukesekvenssit ja koetinsekvenssi on esitetty taulukossa.1Näyte-cDNA:n alikvootit ja yhtä suuri määrä GAPDH-cDNA:ta monistettiin TaqMan® Universal PCR -pääseoksella, joka sisälsi DNA-polymeraasia valmistajan ohjeiden mukaisesti (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). PCR-olosuhteet olivat 2 minuuttia 50 °C:ssa, 10 minuuttia 94 °C:ssa, 15 sekuntia 95 °C:ssa ja 1 minuutti 60 °C:ssa 40 syklin ajan. Kohdegeenin pitoisuus määritettiin käyttämällä vertailevaa Ct-menetelmää (kynnyssyklien lukumäärä monistuskuvaajan ja kynnysarvon risteyspisteessä) valmistajan ohjeiden mukaisesti.

FOB-hinta:0,5–9 999 USD / kpl

Minimitilausmäärä:100 kappaletta/kappaleita

Toimituskyky:10000 kappaletta/kappaletta kuukaudessa

Lähetä meille sähköpostia

Tuotetiedot

Tuotetunnisteet

Nivelrikko (OA) on yleisin tuki- ja liikuntaelimistön sairaus ja yleisin nivelrappeumasairaus ikääntyneillä [1]. Nivelrikko on tila, jonka osittain aiheuttavat vamma, ruston rakenteen ja toiminnan menetys sekä tulehdusta edistävien ja tulehdusta ehkäisevien reittien säätelyn häiriöt [2,3Se vaikuttaa ensisijaisesti nivelnivelten nivelrustoon ja subkondraaliseen luuhun ja johtaa nivelten pettämiseen, mikä puolestaan aiheuttaa kipua painoa kannettaessa, mukaan lukien kävely ja seisominen [4].

Nivelrikkoon ei ole parannuskeinoa, koska rustoa on erittäin vaikea palauttaa sen tuhouduttua [5Hoidon tavoitteena on lievittää kipua, ylläpitää tai parantaa nivelten liikkuvuutta, lisätä nivelten vahvuutta ja minimoida taudin toimintakykyä heikentävät vaikutukset. Nivelrikon farmakologisilla hoidoilla pyritään vähentämään kipua potilaan nivelten toiminnan ja elämänlaadun parantamiseksi. Vaikka ruston tuhoutuminen on nivelrikon pääasiallinen tapahtuma, kollageenin hajoaminen on perustavanlaatuinen tapahtuma, joka määrää nivelrikon peruuttamattoman etenemisen tulehduksen yhteydessä [6,7Tulehdusta estävien ja rustoa suojaavien hoitojen odotetaan lievittävän kipua ja ylläpitävän matriisin eheyttä nivelrikkopotilailla.

Siksi tulehduksen vähentäminen on todennäköisesti hyödyllistä nivelrikon hoidossa. Viimeaikaiset tutkimukset viittaavat siihen, että kasviperäisillä lähteillä on suojaava rooli nivelrikon etenemisessä kondrosyyttien tulehduksen ja ruston tuhoutumisen lieventämisessä, koska ne kykenevät olemaan vuorovaikutuksessa niveliin liittyvien kudosten kanssa ja lievittämään nivelkipua [8].

JuuriSaposhnikovia divaricataSchischkiniä (Umbelliferae) on käytetty laajalti perinteisessä lääketieteessä päänsäryn, kivun, tulehduksen ja niveltulehduksen hoitoon Koreassa ja Kiinassa.9,10]. Monipuoliset farmakologiset vaikutuksetSaposhnikovia divaricata(SD) sisältää myös tulehdusta estäviä, kipua lievittäviä, kuumetta alentavia ja niveltulehdusta estäviä ominaisuuksia [9,11Äskettäin tehdyssä tutkimuksessa osoitettiin, että SD-kromoniuutteella on potentiaalisia nivelreumaa ehkäiseviä vaikutuksia kollageenin aiheuttaman niveltulehduksen hiirimallissa [10]; kuitenkin vain vähän tutkimuksia on tehty tukemaan tulehdusta ja niveltulehdusta estävää vaikutustaSaposhnikovia divaricatauute (SDE).

Siksi tässä tutkimuksessa selvitettiin SD:n 70-prosenttisen etanoliuutteen tulehdusta ja nivelrikkoa estävää vaikutusta. Ensin arvioitiin SDE:n tulehdusta estävää vaikutusta.in vitroLPS:n indusoimissa RAW 264.7 -soluissa. Seuraavaksi SDE:n nivelrikkoa ehkäisevää vaikutusta mitattiin arvioimalla painon kantavuutta, nivelruston hajoamista ja tulehdusvasteita mononatriumjodoasetaatin (MIA) indusoiman nivelrikon rottamallissa.