Puhdas Saposhnikovia divaricata öljy kynttilän ja saippuan valmistukseen tukkuhajottimen eteerinen öljy uusi ruokopolttimen diffuusoriin

lyhyt kuvaus:

2.1. SDE:n valmistelu

SD:n juurakot ostettiin kuivattuina yrtteinä Hanherb Co:lta (Guri, Korea). Tohtori Go-Ya Choi Korean itämaisen lääketieteen instituutista (KIOM) vahvisti kasvimateriaalit taksonomisesti. Lahjakorttinäyte (numero 2014 SDE-6) talletettiin Korean Herbarium of Standard Herbal Resources -kirjastoon. Kuivatut SD:n juurakot (320 g) uutettiin kahdesti 70-prosenttisella etanolilla (2 tunnin palautusjäähdyttäen) ja sitten uute konsentroitiin alennetussa paineessa. Keite suodatettiin, lyofilisoitiin ja säilytettiin 4 °C:ssa. Kuivatun uutteen saanto raa'ista lähtöaineista oli 48,13 % (w/w).

2.2. Kvantitatiivinen korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) -analyysi

Kromatografinen analyysi suoritettiin HPLC-järjestelmällä (Waters Co., Milford, MA, USA) ja valodiodirividetektorilla. SDE:n HPLC-analyysiä varten prim-O-glukosyylisimifugiinistandardi ostettiin Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industrylta (Gyeongsan, Korea) jasec-O-glukosyylihamaudoli ja 4′-O-β-D-glukosyyli-5-O-metyylivisaminoli eristettiin laboratoriossamme ja tunnistettiin spektraalisilla analyyseillä, pääasiassa NMR:llä ja MS:llä.

SDE-näytteet (0,1 mg) liuotettiin 70-prosenttiseen etanoliin (10 ml). Kromatografinen erotus suoritettiin XSelect HSS T3 C18 -kolonnilla (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Liikkuva faasi koostui asetonitriilistä (A) ja 0,1 % etikkahaposta vedessä (B) virtausnopeudella 1,0 ml/min. Monivaiheista gradienttiohjelmaa käytettiin seuraavasti: 5 % A (0 min), 5–20 % A (0–10 min), 20 % A (10–23 min) ja 20–65 % A (23–40 min). ). Havaitsemisaallonpituus skannattiin aallonpituudella 210–400 nm ja tallennettiin aallonpituudella 254 nm. Injektiotilavuus oli 10,0μL. Standardiliuokset kolmen kromonin määrittämistä varten valmistettiin lopullisella konsentraatiolla 7,781 mg/ml (prim-O-glukosyylisimifugiini), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glukosyyli-5-O-metyylivisaminoli) ja 31,125 mg/ml (sec-O-glukosyylihamaudoli) metanolissa ja pidettiin 4 °C:ssa.

2.3. Tulehduksen vastaisen toiminnan arviointiIn vitro

2.3.1. Soluviljely ja näytekäsittely

RAW 264.7 -solut saatiin American Type Culture Collectionista (ATCC, Manassas, VA, USA) ja kasvatettiin DMEM-elatusaineessa, joka sisälsi 1 % antibiootteja ja 5,5 % FBS:ää. Soluja inkuboitiin kostutetussa ilmakehässä, jossa oli 5 % C02:ta 37 °C:ssa. Solujen stimuloimiseksi väliaine korvattiin tuoreella DMEM-elatusaineella ja lipopolysakkaridilla (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) 1 °C:ssaμg/ml lisättiin SDE:n läsnä ollessa tai ilman sitä (200 tai 400μg/ml) vielä 24 tunnin ajan.

2.3.2. Typpioksidin (NO), prostaglandiini E2:n (PGE2), tuumorinekroositekijän määritysα(TNF-α) ja interleukiini-6:n (IL-6) tuotanto

Soluja käsiteltiin SDE:llä ja stimuloitiin LPS:llä 24 tunnin ajan. NO-tuotanto analysoitiin mittaamalla nitriittiä Griess-reagenssilla aikaisemman tutkimuksen mukaan [12]. Tulehduksellisten sytokiinien PGE2, TNF- eritysαja IL-6 määritettiin käyttämällä ELISA-sarjaa (R&D-järjestelmät) valmistajan ohjeiden mukaisesti. SDE:n vaikutukset NO:n ja sytokiinien tuotantoon määritettiin aallonpituudella 540 nm tai 450 nm Wallac EnVisionilla.™mikrolevylukija (PerkinElmer).

2.4. Antiosteoartriitin toiminnan arviointiIn vivo

2.4.1. Eläimet

Urospuoliset Sprague-Dawley-rotat (7 viikkoa vanhoja) ostettiin Samtako Inc:ltä (Osan, Korea) ja niitä pidettiin kontrolloiduissa olosuhteissa 12 tunnin valo/pimeä-syklillä klo.°C ja% kosteus. Rotille annettiin laboratorioruokaa ja vettäad libitum. Kaikki kokeelliset toimenpiteet suoritettiin National Institutes of Health (NIH) -ohjeiden mukaisesti ja Daejeonin yliopiston (Daejeon, Korean tasavalta) eläinten hoito- ja käyttökomitean hyväksymät.

2.4.2. OA:n induktio MIA:lla rotilla

Eläimet satunnaistettiin ja jaettiin hoitoryhmiin ennen tutkimuksen aloittamista (ryhmää kohti). MIA-liuos (3 mg/50μL 0,9 % suolaliuosta) injektoitiin suoraan oikean polven nivelensisäiseen tilaan ketamiinin ja ksylatsiinin seoksella indusoidussa nukutuksessa. Rotat jaettiin satunnaisesti neljään ryhmään: (1) suolaliuosryhmä ilman MIA-injektiota, (2) MIA-ryhmä, jossa oli MIA-injektio, (3) SDE-käsitelty ryhmä (200 mg/kg) MIA-injektiolla ja (4) ) indometasiinilla (IM-) käsitelty ryhmä (2 mg/kg) MIA-injektiolla. Rotille annettiin suun kautta SDE:tä ja IM:ää 1 viikko ennen MIA-injektiota 4 viikon ajan. Tässä tutkimuksessa käytetyt SDE:n ja IM:n annokset perustuivat aiemmissa tutkimuksissa käytettyihin annostuksiin [10,13,14].

2.4.3. Takassun painon jakauman mittaukset

OA-induktion jälkeen takatassujen painonkantokyvyn alkuperäinen tasapaino häiriintyi. Kantavuustoleranssin muutosten arvioimiseen käytettiin kyvyttömyystesteriä (Linton Instrumentation, Norfolk, UK). Rotat asetettiin varovasti mittauskammioon. Takarajan kohdistama painoa kantava voima laskettiin keskiarvoksi 3 sekunnin ajanjaksolta. Painon jakautumissuhde laskettiin seuraavalla yhtälöllä: [oikean takaraajan paino/(oikean takaraajan paino + vasemman takaraajan paino)] × 100 [15].

2.4.4. Seerumin sytokiinitasojen mittaukset

Verinäytteet sentrifugoitiin 1500 g:ssä 10 minuuttia 4 °C:ssa; sitten seerumi kerättiin ja säilytettiin -70 °C:ssa käyttöön asti. IL-1:n tasotβIL-6, TNF-α, ja seerumin PGE2 mitattiin käyttämällä R&D Systemsin (Minneapolis, MN, USA) ELISA-pakkauksia valmistajan ohjeiden mukaisesti.

2.4.5. Reaaliaikainen kvantitatiivinen RT-PCR-analyysi

Kokonais-RNA uutettiin polvinivelkudoksesta käyttämällä TRI-reagenssia® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), käänteistranskriptoitiin cDNA:ksi ja PCR-monistettiin käyttämällä TM One Step RT PCR -pakkausta SYBR vihreällä (Applied Biosystems). , Grand Island, NY, USA). Reaaliaikainen kvantitatiivinen PCR suoritettiin käyttämällä Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR -järjestelmää (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Alukesekvenssit ja koetinsekvenssi on esitetty taulukossa1. Alikvootit näyte-cDNA:sta ja yhtä suuri määrä GAPDH-cDNA:ta monistettiin TaqMan® Universal PCR -perusseoksella, joka sisälsi DNA-polymeraasia valmistajan ohjeiden mukaisesti (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). PCR-olosuhteet olivat 2 min 50 °C:ssa, 10 min 94 °C:ssa, 15 s 95 °C:ssa ja 1 min 60 °C:ssa 40 syklin ajan. Kohdegeenin konsentraatio määritettiin käyttämällä vertailevaa Ct-menetelmää (kynnyssyklin lukumäärä monistuskäyrän ja kynnyksen välisessä risteyskohdassa) valmistajan ohjeiden mukaisesti.

FOB-hinta:0,5 - 9 999 USD / kpl

Minimitilausmäärä:100 kpl / kpl

Toimituskyky:10 000 kappaletta / kappaletta kuukaudessa

Lähetä meille sähköpostia

Tuotetiedot

Tuotetunnisteet

Nivelrikko (OA) on yleisin tuki- ja liikuntaelinsairaus ja yleisin vanhusten rappeuttava nivelsairaus.1]. OA on tila, joka johtuu osittain vammoista, ruston rakenteen ja toiminnan menetyksestä sekä proinflammatoristen ja anti-inflammatoristen reittien säätelyhäiriöistä [2,3]. Se vaikuttaa ensisijaisesti nivelrustoon ja nivelten subkondraaliseen luuhun ja johtaa nivelen vajaatoimintaan, mikä johtaa kipuun painon kantamisen yhteydessä, mukaan lukien kävely ja seisominen.4].

OA:hen ei ole parannuskeinoa, koska ruston palauttaminen on erittäin vaikeaa sen tuhottua [5]. Hoidon tavoitteena on lievittää kipua, ylläpitää tai parantaa nivelten liikkuvuutta, lisätä nivelten lujuutta ja minimoida sairauden vammauttavia vaikutuksia. OA:n lääkehoidoilla pyritään vähentämään kipua potilaan niveltoiminnan ja elämänlaadun parantamiseksi. Vaikka ruston tuhoutuminen on päätapahtuma OA:ssa, kollageenin hajoaminen on perustavanlaatuinen tapahtuma, joka määrittää OA:n peruuttamattoman etenemisen tulehduksen yhteydessä [6,7]. Anti-inflammatorisen ja kondroprotektiivisen vaikutuksen omaavien hoitojen odotetaan lievittävän kipua ja ylläpitävän matriisin eheyttä OA-potilailla.

Siksi tulehduksen vähentäminen on todennäköisesti hyödyllistä OA: n hoidossa. Viimeaikaiset tutkimukset ehdottavat kasviperäisten resurssien suojaavia rooleja OA:n etenemisessä, koska ne vähentävät rustosolutulehdusta ja ruston tuhoa entisestään, koska ne voivat olla vuorovaikutuksessa niveliin liittyvien kudosten kanssa, mikä johtaa nivelkipujen lievitykseen.8].

JuuriSaposhnikovia divaricataSchischkiniä (Umbelliferae) on käytetty laajasti perinteisessä lääketieteessä päänsäryn, kivun, tulehduksen ja niveltulehduksen hoitoon Koreassa ja Kiinassa.9,10]. Monipuoliset farmakologiset vaikutuksetSaposhnikovia divaricata(SD) sisältävät myös anti-inflammatorisia, analgeettisia, antipyreettisiä ja niveltulehduksia estäviä ominaisuuksia [9,11]. Äskettäinen tutkimus osoitti, että SD-kromoniuutteella on potentiaalisia nivelreuman vastaisia vaikutuksia kollageenin aiheuttaman niveltulehduksen hiirimallissa.10]; Kuitenkin vain vähän tutkimuksia on tehty tulehdusta ja niveltulehdusta estävän vaikutuksen tukemiseksiSaposhnikovia divaricataote (SDE).

Siksi tässä tutkimuksessa tutkittiin 70-prosenttisen SD:n etanoliuutteen anti-inflammatorisia ja nivelrikkoa estäviä vaikutuksia. Ensin arvioitiin SDE:n tulehdusta estävä vaikutusin vitroLPS-indusoiduissa RAW 264.7 -soluissa. Seuraavaksi SDE:n nivelrikkoa estävä vaikutus mitattiin arvioimalla painon jakautumista, nivelruston hajoamista ja tulehdusvasteita mononatriumjodiasetaatin (MIA-) indusoiman OA:n rottamallissa.